Journal of Zhejiang University

Current Issue: <JZUS-B>

Journal of Zhejiang University-SCIENCE B (Biomedicine & Biotechnology)

ISSNs 1673-1581 (Print); 1862-1783 (Online); CN 33-1356/Q; started in 2005,Monthly.

JZUS-B is an international "Biomedicine & Biotechnology" reviewed-Journal indexed by SCI-E, MEDLINE, PMC, BA, BIOSIS Previews, JST, ZR, CA, SA, AJ, ZM, CABI, CSA, etc., and supported by the National Natural Science Foundation of China. It mainly covers research in Biomedicine, Biochemistry and Biotechnology, etc.

Impact factor: 1.099 (2011), 1.108 (2012), 1.293 (2013), 1.278 (2014), 1.303 (2015), 1.676 (2016), 1.815 (2017), 1.879 (2018).

Journal of Zhejiang University SCIENCE B

ISSN 1673-1581(Print), 1862-1783(Online), Monthly

2022 Vol.23 No.11 P.881-974

Cover:

<177>

Contents:

<188>

<<< CONTENTS >>>

Review

Review: Recent advances in the use of the CRISPR-Cas system for the detection of infectious pathogens

Hongdan GAO, Zifang SHANG, Siew Yin CHAN, Dongli MA

DOI: 10.1631/jzus.B2200068 Downloaded: 724 Clicked: 834 Cited: 0 Commented: 0(p.881-898) <Full Text> <PPT> 243

Chinese summary <21> CRISPR-CAS系統檢測傳染病病原體(tǐ)的研究進展

高宏丹¹，尚子方^1,2，曾筱瑩³，馬東禮¹
¹深圳市兒童醫院兒科研究所，中(zhōng)國深圳，518026
²中(zhōng)國科學院微生(shēng)物(wù)研究所病原微生(shēng)物(wù)學重點實驗室，中(zhōng)國北(běi)京，100101
³西北(běi)工(gōng)業大(dà)學柔性電子研究院，中(zhōng)國西安，710072
概要：感染性疾病對個人乃至社會均可造成極大(dà)的經濟損失和精神痛苦。現有檢測方法在靈敏度與特異性、檢測時間、昂貴儀器設備依賴方面或多或少存在不足。成簇的規律間隔的短回文重複序列（CRISPR）-相關蛋白(bái)（Cas）系統，因其具備特異、靈敏、快速、便捷等優勢，近年來被嘗試應用于感染性疾病病原體(tǐ)的檢測。本文首先回顧了CRISPR-Cas系統的發現發展進程，并列舉可與之結合獲得檢測結果的檢測結果閱讀方式，之後從檢測過程中(zhōng)所應用的不同Cas蛋白(bái)的角度簡要描述了目前已有的基于CRISRP檢測感染性疾病病原體(tǐ)的應用，最後還展望了CRISPR/Cas系統未來在檢測方面的應用前景及挑戰。

關鍵詞組：CRISPR-Cas；診斷；疾病檢測；傳染病；病原體(tǐ)

Research Articles

Clinical and immune response characteristics among vaccinated persons infected with SARS-CoV-2 delta variant: a retrospective study

Cunjin WANG, Yong LI, Yuchen PAN, Luojing ZHOU, Xi ZHANG, Yan WEI, Fang GUO, Yusheng SHU, Ju GAO

DOI: 10.1631/jzus.B2200054 Downloaded: 705 Clicked: 954 Cited: 0 Commented: 0(p.899-914) <Full Text> <PPT> 246

Chinese summary <23> 新冠疫苗對SARS-CoV-2 Delta感染者臨床症狀和免疫應答反應的影響:一(yī)項回顧性研究

王存金^1,2，李勇^1,2，潘昱辰³，周羅晶²，張曦^2,4，魏豔^1,2，郭芳^1,2，束餘聲^2,5，高巨^1,2
¹蘇北(běi)人民醫院麻醉科，中(zhōng)國揚州市，225001
²揚州大(dà)學臨床醫學院，中(zhōng)國揚州市，225001
³中(zhōng)國人民武裝警察部隊江蘇省總隊醫院神經内科，中(zhōng)國揚州市，225000
⁴蘇北(běi)人民醫院中(zhōng)醫科，中(zhōng)國揚州市，225001
⁵蘇北(běi)人民醫院心胸外(wài)科，中(zhōng)國揚州市，225001
目的：觀察揚州地區疫苗接種對德爾塔（Delta）變異型冠狀病毒（SARS-CoV-2）感染者臨床和免疫應答特征的影響。
方法：提取2021年8-9月蘇北(běi)人民醫院收治的129例Delta變異株感染患者的病例資(zī)料。根據接種疫苗的劑量将患者分(fēn)爲未接種組、一(yī)針組和兩針組。所用疫苗爲北(běi)京科興公司研制的SARS-CoV-2滅活疫苗。我(wǒ)們回顧性分(fēn)析了患者的流行病學、臨床、實驗室和影像學資(zī)料。
結果：揚州地區Delta變異感染患者多數爲老年人，重症/危重患者年齡均在70歲以上。兩針組重症/危重症（P=0.006）患者人數、發熱（P=0.025）和呼吸困難（P=0.045）發生(shēng)率均低于未接種組。與未接種組相比，兩針組住院期間淋巴細胞計數顯著升高，C反應蛋白(bái)（CRP）、白(bái)細胞介素-6（IL-6）和D-二聚體(tǐ)水平顯著降低，入院時免疫球蛋白(bái)G（IgG）抗體(tǐ)陽性率顯著升高（P<0.05）。兩針組的累計出院概率和病毒轉陰概率也高于未接種組（P<0.05）。
結論：接種兩針SARS-CoV-2滅活疫苗在減輕新冠肺炎患者症狀和降低免疫應答方面效果顯著，接種一(yī)針疫苗效果不明顯。

關鍵詞組：冠狀病毒（SARS-CoV-2）；德爾塔（Delta）變異株；疫苗；住院；免疫反應

Optimized thyroid transcription factor-1 core promoter-driven microRNA-7 expression effectively inhibits the growth of human non-small-cell lung cancer cells

Shipeng CHEN, Lian GUAN, Xu ZHAO, Jing YANG, Longqing CHEN, Mengmeng GUO, Juanjuan ZHAO, Chao CHEN, Ya ZHOU, Yong HAN, Lin XU

DOI: 10.1631/jzus.B2200116 Downloaded: 702 Clicked: 1047 Cited: 0 Commented: 0(p.915-930) <Full Text> <PPT> 243

Chinese summary <21> 優化的TTF-1核心啓動子驅動miRNA-7表達有效抑制人非小(xiǎo)細胞肺癌細胞的生(shēng)長

陳世鵬^1,2，官蔹^1,2，趙栩^1,2，楊靜^1,2，陳龍慶^1,2，郭萌萌^1,2，趙娟娟^1,2，陳超^1,2，周涯^1,3，韓勇⁴，徐林^1,2
¹貴州省基因檢測與治療特色重點實驗室暨貴州省生(shēng)物(wù)治療人才基地，中(zhōng)國遵義市，563000
²遵義醫科大(dà)學免疫學教研室，中(zhōng)國遵義市，563000
³遵義醫科大(dà)學醫學物(wù)理系，中(zhōng)國遵義市，563000
⁴遵義醫科大(dà)學生(shēng)理學教研室，中(zhōng)國遵義市，563000
概要：靶向基因治療是一(yī)種很有前景的肺癌治療方法。在前期工(gōng)作中(zhōng)，我(wǒ)們報道了由甲狀腺轉錄因子-1（TTF-1）啓動子調控微小(xiǎo)RNA-7（miR-7）的靶向表達可在體(tǐ)外(wài)和體(tǐ)内抑制人肺癌細胞的生(shēng)長，但幹預效率有待進一(yī)步提高。在本研究中(zhōng)，我(wǒ)們通過5’缺失分(fēn)析鑒定了TTF-1的核心啓動子（從−1299 bp到−871 bp），并篩選出潛在的結合轉錄因子核因子-1（NF-1）和激活蛋白(bái)-1（AP-1）。進一(yī)步分(fēn)析的結果表明：NF-1的表達水平，而非AP-1的表達水平，與人非小(xiǎo)細胞肺癌（NSCLC）細胞中(zhōng)TTF-1核心啓動子的活性呈正相關。此外(wài)，NF-1的沉默可以降低由TTF-1核心啓動子調控的miR-7的表達。重要的是，我(wǒ)們在TTF-1核心啓動子的序列上優化了四個不同的序列（稱爲^optTTF-1啓動子）以形成額外(wài)的NF-1結合位點（TGGCA），并通過電泳遷移率實驗（EMSA）分(fēn)析驗證了NF-1對^optTTF-1啓動子的結合效率。通進一(yī)步研究，結果顯示^optTTF-1啓動子可更有效地驅動miR-7表達并在體(tǐ)外(wài)抑制人NSCLC細胞的生(shēng)長，同時減少Ⅰ型輔酶脫氫酶1α亞複合物(wù)4（NDUFA4）/蛋白(bái)激酶B（Akt）通路轉導。^optTTF-1啓動子驅動的miR-7表達同樣也可有效地抑制人NSCLC異種移植模型中(zhōng)腫瘤細胞的體(tǐ)内生(shēng)長和轉移。最後，模型動物(wù)的心髒、肝髒和脾髒等重要組織和器官的生(shēng)物(wù)學指标和組織學未見明顯變化。總之，本研究揭示了優化的TTF-1啓動子可更有效地調控miR-7表達來抑制人NSCLC細胞的生(shēng)長，爲開(kāi)發基于miRNA的靶向基因治療臨床肺癌提供了新的實驗基礎。

關鍵詞組：肺癌；甲狀腺轉錄因子-1（TTF-1）；啓動子；微小(xiǎo)RNA-7（miR-7）；核因子-1（NF-1）

Application of regional citrate anticoagulation in patients at high risk of bleeding during intermittent hemodialysis: a prospective multicenter randomized controlled trial

Xiaoyan TANG, Dezheng CHEN, Ling ZHANG, Ping FU, Yanxia CHEN, Zhou XIAO, Xiangcheng XIAO, Weisheng PENG, Li CHENG, Yanmin ZHANG, Hongbo LI, Kehui LI, Bizhen GOU, Xin WU, Qian YU, Lijun JIAN, Zaizhi ZHU, Yu WEN, Cheng LIU, Hen XUE, Hongyu ZHANG, Xin HE, Bin YAN, Liping ZHONG, Bin HUANG, Mingying MAO

DOI: 10.1631/jzus.B2200082 Downloaded: 848 Clicked: 915 Cited: 0 Commented: 0(p.931-942) <Full Text> <PPT> 262

Chinese summary <21> 局部枸橼酸鈉抗凝在出血高危患者間歇性血液透析中(zhōng)的臨床應用--一(yī)項前瞻性多中(zhōng)心随機對照研究

唐小(xiǎo)琰^1,2，陳德政²，張淩¹，付平¹，陳豔霞³，肖舟⁴，肖湘成⁴，彭衛生(shēng)⁴，程力⁵，張燕敏⁵，李紅波⁵，李科慧⁶，芶碧珍⁷，吳欣⁷，于黔⁷，蹇麗君⁸，朱再志(zhì)⁹，溫玉¹⁰，劉城¹⁰，薛痕¹¹，張紅玉¹¹，賀欣¹²，嚴斌¹³，鍾利平⁴，黃彬⁴，毛明英²
¹四川大(dà)學華西醫院腎髒研究所，中(zhōng)國成都市，610041
²四川省簡陽市人民醫院腎内科，中(zhōng)國成都市，641400
³南(nán)昌大(dà)學第二附屬醫院腎内科，中(zhōng)國南(nán)昌市，330006
⁴中(zhōng)南(nán)大(dà)學湘雅醫院腎内科，中(zhōng)國長沙市，410008
⁵武漢市第一(yī)醫院腎内科，中(zhōng)國武漢市，430022
⁶廣西醫科大(dà)學第一(yī)附屬醫院血液淨化部，中(zhōng)國南(nán)甯市，530021
⁷貴陽市第一(yī)人民醫院腎内科，中(zhōng)國貴陽市，550002
⁸四川大(dà)學華西醫院金堂醫院腎内科，中(zhōng)國金堂縣，610400
⁹眉山市人民醫院腎内科，中(zhōng)國眉山市，620020
¹⁰資(zī)陽市人民醫院腎内科，中(zhōng)國資(zī)陽市，641300
¹¹雅安市人民醫院腎内科，中(zhōng)國雅安市，625000
¹²成都康福腎髒病醫院腎内科，中(zhōng)國成都市，610047
¹³涼山彜族自治州第一(yī)人民醫院腎内科，中(zhōng)國西昌市，615000
目的：安全有效的抗凝治療對于高危出血風險的血液透析患者至關重要。本試驗的目的是評估應用标準含鈣透析液進行雙段法局部枸橼酸（RCA）聯合序貫抗凝在間歇性血液透析（IHD）治療中(zhōng)的有效性和安全性。
方法：前瞻性納入13個腎内科血液淨化中(zhōng)心2019年9月至2021年5月行IHD的出血高危患者，随機分(fēn)爲RCA組和生(shēng)理鹽水沖洗組。RCA組使用0.04 g/mL枸橼酸鈉分(fēn)别從透析管路的引血端及靜脈壺雙段輸注，透析3小(xiǎo)時後停用枸橼酸鈉，并改爲無抗凝劑模式序貫透析。根據基線計算凝血風險比。
結果：共納入159名患者208例次，包括RCA組（80名，110例次）和鹽水沖洗組（79名，98例次）。RCA組體(tǐ)外(wài)循環管路嚴重凝血事件的發生(shēng)率明顯低于生(shēng)理鹽水沖洗組（3.64% vs. 20.41%，P<0.001）。RCA組濾器管路的生(shēng)存時間較生(shēng)理鹽水沖洗組明顯延長（(238.34±9.33) min和(221.73±34.10) min，P<0.001）。RCA組的尿素清除指數（Kt/V）與生(shēng)理鹽水沖洗組相當，差異無統計學意義（1.12±0.34 vs. 1.08±0.34，P=0.41）。
結論：與生(shēng)理鹽水沖洗相比較，雙段法枸橼酸聯合序貫抗凝能顯著減少體(tǐ)外(wài)循環凝血事件，延長透析時間，且未觀察到嚴重不良事件發生(shēng)。

關鍵詞組：局部枸橼酸抗凝；間歇性血液透析；含鈣透析液；生(shēng)理鹽水沖洗；抗凝

Combination of Se-methylselenocysteine, D-α-tocopheryl succinate, β-carotene, and L-lysine can prevent cancer metastases using as an adjuvant therapy

Yunlong CHENG, Shu LIAN, Shuhui LI, Yusheng LU, Jie WANG, Xiaoxiao DENG, Shengyi ZHAI, Lee JIA

DOI: 10.1631/jzus.B2200232 Downloaded: 675 Clicked: 887 Cited: 0 Commented: 0(p.943-956) <Full Text> <PPT> 258

Chinese summary <20> L-Se-甲基硒代半胱氨酸、D-α-生(shēng)育酚琥珀酸酯、β-胡蘿蔔素和L-賴氨酸聯合作爲輔助治療手段可預防腫瘤轉移

程雲龍^1,2，練殊^1,3，李書(shū)慧²，盧餘盛¹，王傑²，鄧潇潇²，翟勝益²，賈力^1,2,3
¹閩江學院材料與化學工(gōng)程學院智能藥物(wù)閩台港澳科技合作基地，福建福州，350108
²福州大(dà)學化學學院，腫瘤轉移預警與預防研究中(zhōng)心，福建省腫瘤轉移化學預防重點實驗室，福建福州，350002
³閩江學院福州海洋研究院，福建福州，350108
目的：通過手術切除和輔助療法治療原發性腫瘤已被廣泛研究，但對于腫瘤轉移的有效治療策略和藥物(wù)仍然缺乏。本研究中(zhōng)，我(wǒ)們提出了一(yī)種基于組合化合物(wù)的功能性産品用作腫瘤輔助治療，各化合物(wù)機制明确，可抑制癌症轉移、改善抗癌治療、增強免疫力和抗氧化。該組合由四種廉價化合物(wù)組成：L-硒-甲基硒代半胱氨酸（MSC）、D-α-生(shēng)育酚琥珀酸（VES）、β-胡蘿蔔素（β-Ca）和賴氨酸（Lys），命名爲MVBL。
方法：通過體(tǐ)外(wài)實驗研究MVBL對細胞活力、細胞周期、細胞凋亡、細胞遷移、細胞侵襲、活性氧（ROS）和紫杉醇（PTX）聯合治療的影響。在動物(wù)水平測定了MVBL在體(tǐ)内的抗氧化和免疫增強能力。通過小(xiǎo)鼠腫瘤模型測定MVBL在體(tǐ)内對腫瘤轉移的抑制。
結果：MVBL對腫瘤細胞的毒性高于對正常細胞的毒性。它沒有顯著性地影響癌細胞的細胞周期，但增加了細胞凋亡。劃痕、粘附和侵襲實驗結果表明，MVBL顯著抑制腫瘤細胞遷移、粘附和侵襲。MVBL使乳腺癌MDA-MB-231細胞對PTX更敏感，表明它可以作爲佐劑來增強化療藥物(wù)的治療效果。小(xiǎo)鼠實驗數據表明，MVBL可以抑制腫瘤轉移，延長其生(shēng)存時間，增強其抗氧化能力和免疫功能。
結論：本研究揭示了MVBL在提高免疫、抗氧化、防止腫瘤生(shēng)長和抑制體(tǐ)内外(wài)轉移方面的作用。MVBL可用作癌症治療的輔助藥物(wù)，提高癌症患者的生(shēng)存率和生(shēng)活質量。

關鍵詞組：腫瘤預防；腫瘤轉移；硒；聯合用藥；營養

Correspondence

Correspondence: A method for distinguishing benign and malignant pulmonary nodules based on 3D dual path network aided by K-means clustering analysis

Dachuan GAO, Xiaodan YE, Xuewen HOU, Yang CHEN, Xue KONG, Yuanzhong XIE, Shengdong NIE

DOI: 10.1631/jzus.B2101009 Downloaded: 704 Clicked: 774 Cited: 0 Commented: 0(p.957-967) <Full Text> <PPT> 237

Chinese summary <23> 基于三維雙路徑網絡與K均值聚類算法的肺結節良惡性鑒别方法

高大(dà)川¹，葉曉丹²，侯學文¹，陳陽¹，孔雪³，謝元忠³，聶生(shēng)東¹
1上海理工(gōng)大(dà)學健康科學與工(gōng)程學院，中(zhōng)國上海市，200093
2上海市胸科醫院放(fàng)射科，中(zhōng)國上海市，200030
3泰安中(zhōng)心醫院醫學影像中(zhōng)心，中(zhōng)國泰安市，271000
目的：爲了提高肺癌早期診斷的準确性，本文使用機器學習，可以有效地幫助放(fàng)射科醫生(shēng)區分(fēn)肺結節的良惡性。
創新點：基于三維雙路徑網絡（3DDPN）輔助K均值聚類分(fēn)析區分(fēn)良惡性肺結節，類别分(fēn)析可以有效地表示良惡性肺結節的多種潛在亞型。
方法：在這項研究中(zhōng)，我(wǒ)們提出了一(yī)種基于3DDPN并輔以聚類分(fēn)析來識别良惡性肺結節的新分(fēn)類方案。首先，根據四位放(fàng)射科醫生(shēng)的标注結果，從計算機斷層掃描（CT）圖像中(zhōng)截取以肺結節爲中(zhōng)心，尺寸爲64×64×64的像素單元；并訓練pre-3D DPN模型提取卷積神經網絡（CNN）特征。随後，采用随機森(sēn)林特征選擇算法濾除不相關的特征，并采用K均值聚類算法生(shēng)成聚類标簽。最後，使用具有新聚類标簽的數據訓練3D DPN對肺結節進行良惡性分(fēn)類。
結果：使用肺影像數據聯盟-影像數據庫資(zī)源計劃（LIDC-IDRI）數據庫中(zhōng)的966個肺結節進行實驗驗證，最終所提方法的分(fēn)類準确率、敏感度、特異度及接受者操作特性曲線（ROC）下(xià)面積（AUC）分(fēn)别達92.86%、94.44%、91.94%及96.43%。此外(wài)，從上海胸科醫院（SCH）收集了67個結節進行臨床驗證，獲得的準确率爲86.57%。
結論：本文所提出的方法可以準确地區分(fēn)良惡性結節，可作爲肺結節良惡性診斷的計算機輔助方法。

關鍵詞組：計算機斷層掃描（CT）圖像；肺結節；計算機輔助診斷；雙路徑網絡（DPN）；聚類分(fēn)析

Correspondence: High levels of serum IL-10 indicate disease progression, extramedullary involvement, and poor prognosis in multiple myeloma

Xiaoyan YUE, Linlin HUANG, Yang YANG, Yi ZHAO, Donghua HE, Xiaoyan HAN, Gaofeng ZHENG, Yi LI, Enfan ZHANG, Zhen CAI, Xin HUANG, Jingsong HE

DOI: 10.1631/jzus.B2200277 Downloaded: 740 Clicked: 1001 Cited: 0 Commented: 0(p.968-974) <Full Text> <PPT> 275

Chinese summary <21> 血清高水平白(bái)細胞介素-10提示多發性骨髓瘤患者疾病進展、髓外(wài)累及和不良預後

嶽小(xiǎo)豔¹，黃琳琳¹，楊楊¹，趙毅¹，何冬花¹，韓曉雁¹，鄭高鋒¹，李奕¹，張恩帆¹，蔡真^1,2,3，黃昕⁴，何靜松¹
¹浙江大(dà)學醫學院附屬第一(yī)醫院血液科＆骨髓移植中(zhōng)心，中(zhōng)國杭州，310003
²浙江大(dà)學血液學研究所，中(zhōng)國杭州，310058
³浙江大(dà)學醫學中(zhōng)心，浙江省系統&精準醫學實驗室，中(zhōng)國杭州，311121
⁴浙江大(dà)學醫學院附屬第一(yī)醫院血液科&血液學研究所，中(zhōng)國杭州，310003
概要：多發性骨髓瘤（MM）細胞的生(shēng)長和存活依賴于骨髓微環境，其中(zhōng)細胞因子常與疾病的不良預後有關。在新藥治療時代，血清細胞因子水平對MM預後作用需進一(yī)步評估。本研究分(fēn)析了157例初診MM患者外(wài)周血細胞因子水平（包括白(bái)細胞介素-2（IL-2）、IL-4、IL-6、IL-10、幹擾素γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和IL-17A）與患者基線臨床特征、療效以及預後之間的關系。并選用15例年齡契合的健康志(zhì)願者和96例複發MM患者作爲對照。所有患者均一(yī)線接受硼替佐米爲基礎方案的治療。生(shēng)存分(fēn)析表明，上述細胞因子中(zhōng)，僅血清IL-10與患者的無進展生(shēng)存期（PFS）和總生(shēng)存期（OS）顯著相關。初診MM患者中(zhōng)，有103例（65.6%）患者被歸爲高IL-10（≥1.42 pg/mL）組，該組患者通常具有高危基因異常和臨床分(fēn)期，也更容易出現貧血、血小(xiǎo)闆減少，以及血清乳酸脫氫酶、C-反應蛋白(bái)和肌酐水平增高的症狀。單因素分(fēn)析表明高IL-10組患者有更差的PFS（P＝0.040）和OS（P<0.001），多因素分(fēn)析提示血清IL-10是初診MM患者OS的獨立預後因素。研究結果提示，血清IL-10水平與MM患者疾病進展和高危臨床特征相關，可作爲以硼替佐米爲基礎治療方案的初診MM患者OS的預後因素。

關鍵詞組：多發性骨髓瘤；白(bái)細胞介素-10；臨床特征；無進展生(shēng)存期；總生(shēng)存期