Journal of Zhejiang University

Current Issue: <JZUS-B>

Journal of Zhejiang University-SCIENCE B (Biomedicine & Biotechnology)

ISSNs 1673-1581 (Print); 1862-1783 (Online); CN 33-1356/Q; started in 2005,Monthly.

JZUS-B is an international "Biomedicine & Biotechnology" reviewed-Journal indexed by SCI-E, MEDLINE, PMC, BA, BIOSIS Previews, JST, ZR, CA, SA, AJ, ZM, CABI, CSA, etc., and supported by the National Natural Science Foundation of China. It mainly covers research in Biomedicine, Biochemistry and Biotechnology, etc.

Impact factor: 1.099 (2011), 1.108 (2012), 1.293 (2013), 1.278 (2014), 1.303 (2015), 1.676 (2016), 1.815 (2017), 1.879 (2018).

Journal of Zhejiang University SCIENCE B

ISSN 1673-1581(Print), 1862-1783(Online), Monthly

2016 Vol.17 No.6 P.413-492

<<< CONTENTS >>>

Articles

Magnolol pretreatment attenuates heat stress-induced IEC-6 cell injury

Chen Mei, Sha-sha He, Peng Yin, Lei Xu, Ya-ran Shi, Xiao-hong Yu, An Lyu, Feng-hua Liu, Lin-shu Jiang

DOI: 10.1631/jzus.B1500261 Downloaded: 2210 Clicked: 4248 Cited: 2 Commented: 0(p.413-424) <Full Text> <PPT> 1779

Chinese summary <25> 厚樸酚緩解熱應激誘導的小(xiǎo)腸上皮細胞損傷及其分(fēn)子機制

目的：探讨厚樸酚（Mag）對熱應激大(dà)鼠小(xiǎo)腸上皮細胞（IEC-6）修複作用，并初步探讨其作用機制。
創新點：首次在大(dà)鼠小(xiǎo)腸上皮細胞熱應激模型中(zhōng)證明厚樸酚可明顯降低細胞損傷程度，且此作用與細胞周期G1期相關。
方法：本試驗采用大(dà)鼠小(xiǎo)腸上皮細胞（IEC-6）爲研究對象，将其分(fēn)爲五組：對照組（37 °C，5% CO2），熱應激組（42 °C，3 h），熱應激+厚樸酚低濃度組（5 µmol/L），熱應激+厚樸酚中(zhōng)濃度組（10 µmol/L），熱應激+厚樸酚高濃度組（20 µmol/L）。采用MTS法複制熱應激模型及厚樸酚藥物(wù)濃度篩選；采用流式細胞術檢測熱應激造成大(dà)鼠小(xiǎo)腸上皮細胞細胞周期阻滞及不同濃度厚樸酚緩解細胞周期阻滞情況；利用電子顯微鏡觀察熱應激造成的細胞損傷情況；利用熒光電子顯微鏡觀察EdU染色後，熱應激對細胞增殖情況的影響及不同濃度厚樸酚的修複作用；采用熒光定量聚合酶鏈反應（PCR）技術檢測熱應激對細胞周期基因表達影響及不同濃度厚樸酚對細胞周期基因調節作用，采用蛋白(bái)質免疫印迹（Western blot）技術檢測熱應激對細胞周期蛋白(bái)表達的影響及不同濃度厚樸酚對細胞周期蛋白(bái)修複作用。
結論：流式細胞術顯示熱應激造成IEC-6細胞周期阻滞在G1期（96.5%），而三種濃度厚樸酚均可以緩解細胞周期阻滞現象且呈劑量依賴性（5 µmol/L 88.8%，10 µmol/L 81.0%，20 µmol/L 73.5%）。熱應激導緻阻滞細胞分(fēn)裂的G1期基因p21、p27和Rb顯著上調（P<0.01），顯示細胞周期阻滞，不同濃度厚樸酚下(xià)調這三個基因表達且呈劑量依賴性；促進細胞分(fēn)裂的G1期基因E2F1、CDK4和cyclin D1表達顯著下(xià)調（P<0.01），顯示細胞周期阻滞不能正常增值，厚樸酚有效上調這三個基因表達水平。熱應激導緻G1期阻滞細胞分(fēn)裂蛋白(bái)p21及p27上調顯著（P<0.01），厚樸酚有效下(xià)調p21及p27蛋白(bái)表達，且在20 µmol/L濃度時效果最佳；而G1期促進細胞分(fēn)裂蛋白(bái)pRb、E2F1、CDK4和cyclin D1（CCND1）在熱應激下(xià)表達顯著下(xià)調（P<0.01），厚樸酚具有一(yī)定上調以上四個蛋白(bái)的作用，且在20 µmol/L濃度時效果最佳。厚樸酚作爲天然成分(fēn)藥物(wù)，通過緩解熱應激造成的IEC-6細胞G1期細胞周期阻滞，具有緩解熱應激造成的細胞損傷能力，有望作爲預防畜禽熱應激的飼料添加劑。

關鍵詞組：細胞周期阻滞；細胞損傷；熱應激；IEC-6；厚樸酚

Inhibitory effect of Gardenblue blueberry (Vaccinium ashei Reade) anthocyanin extracts on lipopolysaccharide-stimulated inflammatory response in RAW 264.7 cells

Wei Xu, Qing Zhou, Yong Yao, Xing Li, Jiu-liang Zhang, Guan-hua Su, Ai-ping Deng

DOI: 10.1631/jzus.B1500213 Downloaded: 2997 Clicked: 5677 Cited: 4 Commented: 0(p.425-436) <Full Text> <PPT> 2256

Chinese summary <1029> 藍(lán)莓花青素對RAW 264.7細胞的抗炎活性研究及其機理初探

目的：以園藍(lán)爲研究材料，鑒定園藍(lán)花青素提取物(wù)（GBBAEs）中(zhōng)的功能性成分(fēn)的結構，建立脂多糖（LPS）誘導的體(tǐ)外(wài)炎症模型，并評價其抗炎作用和初步機制。
創新點：首次探究了藍(lán)莓花青素對建立的LPS誘導體(tǐ)外(wài)炎症模型的營養幹預作用，并初步探究了發揮抗炎機制的作用通路。
方法：将RAW 264.7細胞分(fēn)爲對照組（不作處理）和實驗組（1 µg/ml LPS刺激建模）。實驗組進一(yī)步分(fēn)爲3個不同濃度組：400 µg/ml GBBAEs組、800 µg/ml GBBAEs組和1200 µg/ml GBBAEs組。用酶聯免疫吸附測定（ELISA）試劑盒檢測一(yī)氧化氮（NO）、前列腺素E₂（PGE₂）、白(bái)細胞介素1β（IL-1β）、白(bái)細胞介素6（IL-6）、幹擾素γ（INF-γ）等炎症因子的釋放(fàng)量；用實時定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）分(fēn)析IL-1β、IL-6、TNF-α、環氧合酶-2（COX-2）及單核細胞趨化蛋白(bái)-1（MCP-1）的炎症相關基因mRNA的表達水平；用蛋白(bái)質印迹法（Western blot法）測定相關炎症蛋白(bái)COX-2和NF-κBp65表達水平。
結論：試驗結果表明，通過ELISA法測定GBBAEs可以顯著性抑制NO、PGE₂、IL-1β、IL-6、INF-γ等炎症因子的釋放(fàng)；RT-PCR分(fēn)析闡明在LPS誘導的單核-巨噬細胞RAW 264.7中(zhōng)，GBBAEs可以顯著性抑制IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2及MCP-1的炎症相關基因mRNA的表達水平。此外(wài)，Western blot法進一(yī)步顯示GBBAEs對相關炎症蛋白(bái)COX-2和NF-κBp65表達具有明顯抑制作用，進一(yī)步證實GBBAEs通過NF-κB機制通路來發揮抗炎作用。

關鍵詞組：園藍(lán)花青素；抗炎；單核-巨噬細胞RAW 264.7細胞；環氧合酶-2（COX-2）；NF-κBp65

Myricetin protects against diet-induced obesity and ameliorates oxidative stress in C57BL/6 mice

Hong-ming Su, Li-na Feng, Xiao-dong Zheng, Wei Chen

DOI: 10.1631/jzus.B1600074 Downloaded: 2327 Clicked: 5036 Cited: 4 Commented: 0(p.437-446) <Full Text> <PPT> 1925

Chinese summary <25> 楊梅素對膳食誘導的C57BL/6小(xiǎo)鼠肥胖及氧化應激的幹預作用

目的：研究楊梅素（myricetin）對高脂膳食（HFD）誘導的C57BL/6小(xiǎo)鼠肥胖的幹預作用，并探讨其作用機理。
創新點：首次在高脂膳食誘導的C57BL/6肥胖小(xiǎo)鼠模型中(zhōng)證明楊梅素可明顯減輕肥胖小(xiǎo)鼠的體(tǐ)重，同時改善伴随肥胖的氧化應激和炎症。分(fēn)子機理研究表明楊梅素通過下(xià)調脂代謝相關的轉錄因子（PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c）mRNA的表達，從而發揮減肥功效。
方法：将C57BL/6小(xiǎo)鼠分(fēn)爲正常膳食組（ND，n=12）和高脂膳食組（HFD，n=24），分(fēn)别給予正常膳食和高脂膳食喂食2周。之後，高脂膳食組分(fēn)爲高脂膳食組（n=12）和楊梅素保護組（HFD+M，灌胃150 mg/(kg·d)的楊梅素，n=12），繼續處理10周。分(fēn)析小(xiǎo)鼠常規生(shēng)理指标（體(tǐ)重和髒器重量）、生(shēng)化指标（血糖濃度、甘油三酯和總膽固醇含量）、氧化應激指标（谷胱甘肽過氧化物(wù)酶（GPX）、超氧化物(wù)歧化酶（SOD）和總抗氧化能力（T-AOC））和炎症指标（腫瘤壞死因子α（TNF-α））等。蘇木精-伊紅染色法（H&E）和油紅染色法分(fēn)别觀察脂肪組織和肝髒組織形态。實時逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）分(fēn)析小(xiǎo)鼠脂肪組織PPARγ、C/EBPα和SREBP-1c等基因的mRNA表達水平。
結論：與高脂膳食對照組相比，楊梅素處理可以顯著減輕肥胖小(xiǎo)鼠的體(tǐ)重。同時能顯著降低肥胖小(xiǎo)鼠血糖、甘油三酯和總膽固醇的含量。此外(wài)，楊梅素處理能緩解伴随肥胖的氧化應激（GPX活性、T-AOC和丙二醛（MDA））和炎症（TNF-α）。分(fēn)子機理研究發現楊梅素通過下(xià)調脂肪細胞生(shēng)成（PPARγ和C/EBPα）和脂質合成（SREBP-1c）密切相關的轉錄因子的mRNA表達。本研究結果将爲楊梅素減肥産品的開(kāi)發提供一(yī)定的理論依據。

關鍵詞組：楊梅素；肥胖；脂肪生(shēng)成；氧化應激

Apigenin-7-O-β-D-glycoside isolation from the highly copper-tolerant plant Elsholtzia splendens

Hong-yun Peng, Xue-hong Zhang, Jin-zhong Xu

DOI: 10.1631/jzus.B1500242 Downloaded: 2554 Clicked: 4619 Cited: 0 Commented: 0(p.447-454) <Full Text> <PPT> 1805

Chinese summary <23> 從銅耐性植物(wù)海州香薷中(zhōng)提取分(fēn)離(lí)芹菜素糖苷

目的：建立從銅耐性植物(wù)海州香薷地上部提取分(fēn)離(lí)芹菜素糖苷的工(gōng)藝技術，探索銅耐性植物(wù)海州香薷資(zī)源化途徑。
創新點：結合使用大(dà)孔樹(shù)脂、凝膠樹(shù)脂、聚酰胺樹(shù)脂多種色譜柱技術，從銅耐性植物(wù)海州香薷中(zhōng)提取分(fēn)離(lí)純度達98%的黃酮苷類化合物(wù)芹菜素糖苷。
方法：以銅耐性植物(wù)海州香薷爲原料，用60%乙醇溶液浸提，提取液依次使用石油醚、乙酸乙酯、飽和正丁醇萃取。實驗中(zhōng)，對飽和正丁醇萃取層，使用D101型大(dà)孔吸附樹(shù)脂粗分(fēn)離(lí)提取，Sephadex™ LH-20型凝膠篩分(fēn)分(fēn)離(lí)，并借助半制備液相和聚酰胺樹(shù)脂分(fēn)離(lí)純化，得到芹菜素糖苷單體(tǐ)（圖1）。利用紫外(wài)光譜、液相色譜–質譜聯用、紅外(wài)光譜、一(yī)維和二維核磁圖譜，鑒定芹菜素糖苷結構（圖2~5）。
結論：芹菜素糖苷是銅耐性植物(wù)海州香薷體(tǐ)内的天然産物(wù)，利用色譜技術可以從海州香薷植物(wù)體(tǐ)中(zhōng)分(fēn)離(lí)出芹菜素糖苷單體(tǐ)。

關鍵詞組：色譜分(fēn)離(lí)；銅耐性植物(wù)；海州香薷；黃酮苷；結構解析

Characterization of β-glucosidase from Aspergillus terreus and its application in the hydrolysis of soybean isoflavones

Feng-ying Yan, Wei Xia, Xiao-xu Zhang, Sha Chen, Xin-zheng Nie, Li-chun Qian

DOI: 10.1631/jzus.B1500317 Downloaded: 2218 Clicked: 4065 Cited: 1 Commented: 0(p.455-464) <Full Text> <PPT> 1759

Chinese summary <23> 土曲黴來源的β-葡萄糖苷酶的酶學特性及其對大(dà)豆異黃酮的水解

目的：分(fēn)離(lí)純化土曲黴來源的β-葡萄糖苷酶（At-Bgl），探究其酶學特性及其對大(dà)豆異黃酮的水解效果。
創新點：成功将At-Bgl分(fēn)離(lí)純化出來，并首次将分(fēn)離(lí)純化後的At-Bgl應用于水解大(dà)豆異黃酮糖苷。
方法：利用超濾、透析、陰離(lí)子交換柱層析和聚丙烯酰氨凝膠電泳（SDS-PAGE）等手段分(fēn)離(lí)純化土曲黴來源的β-葡萄糖苷酶（表1），并用解析電離(lí)串聯飛行時間質譜技術（MALDI-TOF/TOF MS）鑒定蛋白(bái)條帶。以對硝基苯基β-D-葡萄糖苷（pNPG）爲底物(wù)進行酶學特性研究；以pNPG和纖維二糖爲底物(wù)，進行酶動力學參數研究（表2）；以胃蛋白(bái)酶和胰蛋白(bái)酶模拟動物(wù)胃腸道酸性環境，進行酸耐受性研究。通過高效液相色譜（HPLC）檢測At-Bgl對大(dà)豆異黃酮糖苷的水解效果（表3）。
結論：At-Bgl屬糖苷水解酶第三家族（GH3），分(fēn)子量約爲120 kDa（圖1），最适酶解條件爲pH 5.0和65 °C，具有良好的熱穩定性和pH穩定性（圖2），且胃蛋白(bái)酶和胰蛋白(bái)酶耐受性強（圖3）。At-Bgl可将大(dà)豆異黃酮糖苷高效轉化爲異黃酮苷元（圖4）。綜上所述，At-Bgl在增強動物(wù)胃腸道對大(dà)豆異黃酮的水解方面具有重要應用價值。

關鍵詞組：β-葡萄糖苷酶；土曲黴；酶學特性；水解；大(dà)豆異黃酮

Molecularly imprinted polymers as the extracted sorbents of clenbuterol ahead of liquid chromatographic determination

Sovichea Lay, Hai-ning Yu, Bao-xiang Hu, Sheng-rong Shen

DOI: 10.1631/jzus.B1500225 Downloaded: 2255 Clicked: 3865 Cited: 0 Commented: 0(p.465-475) <Full Text> <PPT> 1744

Chinese summary <25> 分(fēn)子印迹聚合物(wù)作爲吸附劑結合液相色譜法測定鹽酸克侖特羅

目的：測定豬肝髒中(zhōng)微量鹽酸克侖特羅的殘留量。
創新點：開(kāi)發一(yī)種新的瘦肉精檢測方法。
方法：用β-環糊精（ally-β-CD）和甲基丙烯酸（MAA）爲功能單體(tǐ)制作分(fēn)子印迹聚合物(wù)（MIP），以鹽酸克倫特羅作爲模闆，用乙烯乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）作爲交聯劑。聯合使用ally-β-CD和MAA作爲二元功能單體(tǐ)，能合成高質量的鹽酸克倫特羅模闆。
結論：與丙烯腈制作的MIP（M-AN）和甲基丙烯酸甲酯制作的MIP（M-MMA）相比，MAA制作的MIP聚合物(wù)（M-MAA）被證明具有更好的選擇性萃取能力，被用來進行分(fēn)子印記固相萃取豬肝中(zhōng)殘留物(wù)。研究結果發現，其回收率高（91.03%~96.76%），且相對标準偏差低（RSD≤4.45%）。因此，這種方法可以用于食品質量和安全的分(fēn)析，具有簡單、成本低廉的特點，能夠快速檢測豬肝中(zhōng)的瘦肉精殘留量。

關鍵詞組：分(fēn)子印迹聚合物(wù)；分(fēn)子印迹固相萃取；鹽酸克侖特羅；β-環糊精

Evaluation of the major royal jelly proteins as an alternative to fetal bovine serum in culturing human cell lines

Di Chen, Xiao-xuan Xin, Hao-cheng Qian, Zhang-yin Yu, Li-rong Shen

DOI: 10.1631/jzus.B1500295 Downloaded: 2519 Clicked: 3792 Cited: 1 Commented: 0(p.476-483) <Full Text> <PPT> 1704

Chinese summary <23> 蜂王漿主蛋白(bái)（MRJPs）作爲滅活胎牛血清（FBS）替代品培養人體(tǐ)細胞的效果評價

目的：爲MRJPs應用于人體(tǐ)細胞培養提供科學依據，爲發展蜂王漿在細胞工(gōng)程的新用途提供技術支撐。
創新點：首次驗證MRJPs對多種人體(tǐ)細胞的促分(fēn)裂效果，證實MRJPs可部分(fēn)替代FBS培養人體(tǐ)細胞，并取得培養人體(tǐ)細胞的MRJPs與FBS和細胞因子的适合比例。
方法：鮮蜂王漿中(zhōng)分(fēn)離(lí)得到的MRJPs溶液與FBS按不同比例（0/10、3/7、6/4和9/1）複配成複合血清，分(fēn)别添加于無血清培養基中(zhōng)用于培養293T、HFL-I、231、HCT116和Changliver等5種人體(tǐ)細胞。以添加體(tǐ)積分(fēn)數爲10%的FBS的無血清培養基爲對照，根據MTT法測定的吸光度和細胞形态比較分(fēn)析結果，得到促進細胞分(fēn)裂的MRJPs溶液與FBS最佳配合比例。然後在篩選出的最佳複合血清中(zhōng)添加不同的細胞因子，再通過同樣的比較分(fēn)析，得到适合的細胞因子組合。
結論：MRJPs對多種人體(tǐ)細胞具有促進分(fēn)裂作用，可部分(fēn)替代FBS培養人體(tǐ)細胞。MRJPs與FBS的最佳配比爲：60% MRJPs溶液和40% FBS（複合血清）；該複合血清與細胞因子的最佳組合爲：複合血清+表皮生(shēng)長因子+胰島素-轉鐵蛋白(bái)-硒。

關鍵詞組：蜂王漿主蛋白(bái)；滅活胎牛血清；細胞培養基；替代品；分(fēn)裂；細胞因子

Investigation of absorption and scattering characteristics of kiwifruit tissue using a single integrating sphere system

Zhen-huan Fang, Xia-ping Fu, Xue-ming He

DOI: 10.1631/jzus.B1500086 Downloaded: 2072 Clicked: 3514 Cited: 3 Commented: 0(p.484-492) <Full Text> <PPT> 1529

Chinese summary <24> 基于單積分(fēn)球系統的猕猴桃組織吸收和散射特性

目的：開(kāi)展水果組織的光傳輸特性檢測分(fēn)析，以猕猴桃組織爲例探讨其在632.8 nm波長的光傳輸特性。
創新點：開(kāi)發基于單積分(fēn)球的水果組織光傳輸特性自動檢測系統，驗證其可靠性并應用于水果組織的分(fēn)析，并獲得猕猴桃組織不同部位在632.8 nm的吸收和散射系數。
方法：利用所搭建的單積分(fēn)球系統，獲取三個不同部位（果肉、種子和種子基座）組織的全反射和全透射信息，測量各個組織切片的厚度及折射率。運用逆倍增算法計算得到各組織樣本的吸收系數μa和約化散射系數μ_s’，并根據計算所得結果對猕猴桃不同組織的光傳輸特性進行比較分(fēn)析。
結論：本實驗結果測得猕猴桃不同部位組織的吸收系數和散射系數分(fēn)别爲0.031~0.308 mm⁻¹和0.120~0.946 mm⁻¹，并顯示猕猴桃不同部位組織的吸收和散射特性具有顯著差異。種子部位受随機分(fēn)散的種子的影響較大(dà)，組織較均勻的果肉和種子基座部位結果證實散射系數大(dà)于吸收系數，符合生(shēng)物(wù)組織高散射介質特性。這些結果說明了定量測定組織的光傳輸特性參數對深入研究光與水果組織相互作用的重要性。

關鍵詞組：光學特性；積分(fēn)球；逆倍增算法；猕猴桃