Journal of Zhejiang University

Current Issue: <JZUS-B>

Journal of Zhejiang University-SCIENCE B (Biomedicine & Biotechnology)

ISSNs 1673-1581 (Print); 1862-1783 (Online); CN 33-1356/Q; started in 2005,Monthly.

JZUS-B is an international "Biomedicine & Biotechnology" reviewed-Journal indexed by SCI-E, MEDLINE, PMC, BA, BIOSIS Previews, JST, ZR, CA, SA, AJ, ZM, CABI, CSA, etc., and supported by the National Natural Science Foundation of China. It mainly covers research in Biomedicine, Biochemistry and Biotechnology, etc.

Impact factor: 1.099 (2011), 1.108 (2012), 1.293 (2013), 1.278 (2014), 1.303 (2015), 1.676 (2016), 1.815 (2017), 1.879 (2018).

Journal of Zhejiang University SCIENCE B

ISSN 1673-1581(Print), 1862-1783(Online), Monthly

2016 Vol.17 No.4 P.247-332

<<< CONTENTS >>>

Review

Review: Function, kinetic properties, crystallization, and regulation of microbial malate dehydrogenase

Tóshiko Takahashi-Íñiguez, Nelly Aburto-Rodríguez, Ana Laura Vilchis-González, María Elena Flores

DOI: 10.1631/jzus.B1500219 Downloaded: 2768 Clicked: 4155 Cited: 2 Commented: 0(p.247-261) <Full Text> <PPT> 1765

Chinese summary <157> 微生(shēng)物(wù)蘋果酸脫氫酶的功能、動力學特征、晶體(tǐ)結構以及調控

概要：蘋果酸脫氫酶（MDH）廣泛存在于動物(wù)、植物(wù)以及微生(shēng)物(wù)體(tǐ)内，是生(shēng)物(wù)體(tǐ)進行糖代謝的關鍵酶之一(yī)。在輔酶I（NAD⁺）或輔酶II（NADP⁺）的作用下(xià)，能夠催化草酰乙酸和蘋果酸之間相互轉化。雖然目前真核微生(shēng)物(wù)中(zhōng)MDH已被廣泛研究，但是對原核生(shēng)物(wù)中(zhōng)的這種酶卻鮮有報道。因此，有必要對MDH的相關研究信息進行綜述，以期更好地了解這種酶的功能。本文綜述了細菌相關研究的各種數據信息，進一(yī)步挖掘MDH的分(fēn)子多樣性，包括分(fēn)子量、低聚态、輔因子與底物(wù)的結合力，以及酶反應方向的差異等。通過對不同細菌來源的MDH的晶體(tǐ)結構的分(fēn)析，可鑒别底物(wù)與輔因子結合的部位以及形成二聚體(tǐ)的重要殘基。對這些結構信息的了解将有利于指導研究人員(yuán)對酶的結構進行修飾從而提高其催化能力，比如增加酶的活性、輔助因子的結合能力、底物(wù)特異性和熱穩定性等。另外(wài)，本文通過分(fēn)析比較MDH系統發生(shēng)樹(shù)的重建，将其蛋白(bái)超家族分(fēn)成兩個主分(fēn)支，同時在古生(shēng)菌、細菌和真核微生(shēng)物(wù)等不同細胞的MDH之間建立聯系。

關鍵詞組：蘋果酸脫氫酶；碳代謝；三羧酸循環

Articles

Changes in the physiological properties and kinetics of citric acid accumulation via carbon ion irradiation mutagenesis of Aspergillus niger

Wei Hu, Ji-hong Chen, Shu-yang Wang, Jing Liu, Yuan Song, Qing-feng Wu, Wen-jian Li

DOI: 10.1631/jzus.B1500120 Downloaded: 2787 Clicked: 3879 Cited: 1 Commented: 0(p.262-270) <Full Text> <PPT> 1730

Chinese summary <22> 碳離(lí)子束誘導黑曲黴生(shēng)理特性的改變與其檸檬酸積累關系的研究

目的：探讨黑曲黴生(shēng)理特性的改變對其檸檬酸積累的影響。
創新點：首次報道了碳離(lí)子束對黑曲黴生(shēng)理特性的影響，提出黑曲黴生(shēng)理特性的改變對其檸檬酸的積累有影響。
方法：（1）孢子直徑和孢子活力的測定：利用流式細胞儀對兩株黑曲黴突變菌株以及原始菌株進行了孢子直徑測定。通過該實驗說明碳離(lí)子束可以誘導黑曲黴孢子直徑發生(shēng)改變（表1）。利用MTT法，測定了突變菌株和原始菌株孢子活力。同時，通過該實驗表明碳離(lí)子束可以誘導黑曲黴孢子活力發生(shēng)改變（圖1）。（2）生(shēng)長速率的測定：利用不同糖分(fēn)的平闆生(shēng)長法測定了突變體(tǐ)和原始菌株生(shēng)長速度的差異。通過該實驗說明碳離(lí)子束可以誘導黑曲黴生(shēng)長速率發生(shēng)改變（圖3和圖4）。（3）檸檬酸積累實驗：利用搖瓶發酵實驗和10 L發酵罐擴培實驗測定了突變體(tǐ)和原始菌株檸檬酸積累的差異。通過該實驗說明生(shēng)理特性改變的突變體(tǐ)與原始菌株在檸檬酸積累上存在顯著差異（圖6~8）。
結論：通過兩株黑曲黴突變體(tǐ)與原始菌株之間生(shēng)理特性的差異研究，我(wǒ)們發現黑曲黴生(shēng)理特性的改變對其檸檬酸積累有一(yī)定的影響，低的黑曲黴孢子活力以及生(shēng)長速率對檸檬酸的積累是有益的。最終，獲得了一(yī)株高産菌株HW2，其10 L發酵罐檸檬酸的積累能力比原始菌株提高了18%。

關鍵詞組：碳離(lí)子束輻照；生(shēng)理特性；突變；檸檬酸積累

Antagonistic interaction between Trichoderma asperellum and Phytophthora capsici in vitro

Heng Jiang, Liang Zhang, Jing-ze Zhang, Mohammad Reza Ojaghian, Kevin D. Hyde

DOI: 10.1631/jzus.B1500243 Downloaded: 2559 Clicked: 3598 Cited: 0 Commented: 0(p.271-281) <Full Text> <PPT> 1647

Chinese summary <19> 體(tǐ)外(wài)棘孢木黴與辣椒疫黴菌的拮抗互作

目的：篩選出對辣椒疫黴菌具有高效拮抗作用的木黴生(shēng)防菌株，研究其對辣椒菌菌絲體(tǐ)和卵孢子的作用機制，評價其應用于辣椒疫病的生(shēng)防潛力。
創新點：首次在超微結構水平上報道棘孢木黴菌菌絲能重寄生(shēng)于辣椒疫黴菌的卵孢子，爲木黴生(shēng)防菌的應用提供了科學理論依據。
方法：從土壤中(zhōng)分(fēn)離(lí)木黴菌株，采用對峙培養法篩選木黴生(shēng)防菌株。通過形态學和多基因序列（ITS、tef1和rpb2）進行鑒定，明确獲得木黴菌株的種類。通過細胞學和超微結構觀察，研究木黴生(shēng)防菌對辣椒疫黴菌菌絲和卵孢子的拮抗機制。
結論：本研究篩選出了對辣椒疫黴菌菌絲具有高效拮抗作用的一(yī)個木黴菌株（CGMCC 6422），被鑒定爲棘孢木黴菌（Trichoderma asperellum）。細胞學和超微結構顯示，該菌株能塌陷辣椒疫黴菌的菌落，通過纏繞和穿透辣椒疫黴菌的菌絲體(tǐ)，引起菌絲體(tǐ)解體(tǐ)；首次觀察到該菌株能侵染辣椒疫黴菌的卵孢子，并引起卵孢子完全降解。綜上所述，篩選出的木黴生(shēng)防菌株CGMCC 6422具有應用于防治辣椒疫病的生(shēng)防潛力。

關鍵詞組：拮抗作用；電子顯微鏡；藏卵器；卵孢子；辣椒

Evaluation of a water-soluble adjuvant for the development of monoclonal antibodies against small-molecule compounds

Rui Liu, Ying Liu, Mei-jing Lan, Niusha Taheri, Jing-li Cheng, Yi-rong Guo, Guo-nian Zhu

DOI: 10.1631/jzus.B1500278 Downloaded: 2284 Clicked: 3463 Cited: 5 Commented: 0(p.282-293) <Full Text> <PPT> 1691

Chinese summary <19> 一(yī)種水溶性免疫佐劑應用于小(xiǎo)分(fēn)子化合物(wù)單克隆抗體(tǐ)制備的效果評價

目的：評價一(yī)種新型水溶性免疫佐劑在制備小(xiǎo)分(fēn)子化合物(wù)單克隆抗體(tǐ)（單抗）中(zhōng)的應用效果。
創新點：采用一(yī)種新型水溶性免疫佐劑，快速制備了分(fēn)别針對4種農藥和1種海洋毒素的高親合力單抗，且其性能與以往采用弗氏佐劑獲得的相應單抗非常接近。
方法：本研究以4種農藥和1種海洋毒素爲目标分(fēn)析物(wù)，采用一(yī)種新型水溶性佐劑與小(xiǎo)分(fēn)子抗原相互混合，直接對Balb/c小(xiǎo)鼠進行小(xiǎo)腿肌肉注射免疫。經過2~3次免疫後進行腹腔注射常規末次免疫，細胞融合後篩選出了相應的雜(zá)交瘤細胞株，制備并鑒定了針對上述半抗原小(xiǎo)分(fēn)子的特異性單抗。
結論：采用該水溶性免疫佐劑制備抗原注射溶液無需乳化過程，免疫操作簡便，且對小(xiǎo)鼠負面效應較小(xiǎo)；雖然該處理小(xiǎo)鼠産生(shēng)的抗血清效價并沒有像常規弗氏免疫佐劑帶來的效價值高，但細胞融合後篩選得到有效細胞株的概率尚可；獲得的針對目标分(fēn)析物(wù)的單抗在靈敏度和特異性等方面都接近于以往采用弗氏佐劑獲得的單抗。試驗結果表明，該水溶性免疫佐劑适用于針對小(xiǎo)分(fēn)子化合物(wù)單抗的高效制備。

關鍵詞組：水溶性免疫佐劑；單克隆抗體(tǐ)；半抗原特異性；高親合力

Effects of ammonium application rate on uptake of soil adsorbed amino acids by rice

Xiao-chuang Cao, Qing-xu Ma, Liang-huan Wu, Lian-feng Zhu, Qian-yu Jin

DOI: 10.1631/jzus.B1500203 Downloaded: 2275 Clicked: 4954 Cited: 0 Commented: 0(p.294-302) <Full Text> <PPT> 1720

Chinese summary <20> 铵态氮施用量對水稻幼苗吸收土壤吸附态氨基酸的影響

目的：通過采用無菌土培培養方法，闡明外(wài)源高铵态氮施用量與水稻幼苗生(shēng)長、土壤吸附态氨基酸吸收之間的關系。
創新點：借助無菌培養和¹⁵N同位素示蹤方法，揭示高铵态氮濃度條件下(xià)土壤吸附态氨基酸對水稻幼苗生(shēng)長發育及其氮營養貢獻的影響。
方法：采集兩種不同生(shēng)态系統的土壤A和B，經0.5 mol/L K₂SO₄連續淋洗5次，121 °C滅菌30 min，¹⁵N-甘氨酸處理後，根據甘氨酸吸附曲線（圖1）确定甘氨酸吸附飽和點和吸附半飽和點，然後向土壤中(zhōng)添加一(yī)些不同濃度的铵态氮，水稻幼苗無菌培養21天後，用MAT-271質譜儀測定水稻幼苗氨基酸吸收量。
結論：實驗結果表明土壤甘氨酸吸附能力大(dà)小(xiǎo)與土壤理化性質緊密相關，如有機質和陽離(lí)子交換量。外(wài)源高铵态氮水平顯著抑制水稻幼苗生(shēng)長發育（P<0.05），但甘氨酸吸收及其氮營養貢獻與甘氨酸吸附能力大(dà)小(xiǎo)無關，而與土壤吸附态甘氨酸和铵态氮的濃度比值顯著相關（P<0.05）。經過21天的無菌培養，土壤吸附态氨基酸對水稻的氮營養貢獻率達8.8%~22.6%，表明土壤吸附态氨基酸理論上可能作爲植物(wù)的一(yī)種潛在重要營養氮源。

關鍵詞組：吸附态氨基酸；铵态氮；甘氨酸生(shēng)物(wù)有效性；無菌培養

Follicle-stimulating hormone increases the intramuscular fat content and expression of lipid biosynthesis genes in chicken breast muscle

Xiao-yan Cui, Ying-ying Li, Ran-ran Liu, Gui-ping Zhao, Mai-qing Zheng, Qing-he Li, Jie Wen

DOI: 10.1631/jzus.B1500139 Downloaded: 2285 Clicked: 4258 Cited: 1 Commented: 0(p.303-310) <Full Text> <PPT> 1643

Chinese summary <22> 卵泡刺激素增加雞胸肌中(zhōng)肌内脂肪含量和脂質合成基因的表達

目的：肌内脂肪（IMF）是衡量雞肉品質的一(yī)個重要指标，其遺傳機理是複雜(zá)的。探讨卵泡刺激素（FSH）對IMF的調控作用，有利于更好地理解雞肉中(zhōng)IMF沉積的分(fēn)子機制。
創新點：在雞上證明FSH可促進胸肌中(zhōng)IMF的沉積，且此作用與脂質合成基因表達上調有關。
方法：将7日齡北(běi)京油雞母雞分(fēn)爲對照組（皮下(xià)注射生(shēng)理鹽水）和處理組（皮下(xià)注射4 mIU雞FSH）。連續注射7天後采集血清和組織，采用氯仿-甲醇法抽提脂肪，測定胸肌甘油三酯含量；采用雞特異性酶聯免疫吸附測定（ELISA）試劑盒檢測血清FSH含量；使用實時定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測胸肌和腹脂組織中(zhōng)FAS、LPL、DGAT2、A-FABP和PPARγ基因的表達水平，并對基因表達數據做主成份分(fēn)析（PCA）以檢測樣本的重複性。
結論：本實驗結果顯示外(wài)源FSH注射能顯著提高雞的胸肌甘油三酯含量和腹脂含量（圖1）；同時能顯著上調胸肌和腹脂組織中(zhōng)FAS、LPL、DGAT2、A-FABP和PPARγ基因的表達（圖2）。本研究結果表明FSH可能通過調控脂類合成基因的表達來促進母雞IMF沉積。

關鍵詞組：卵泡刺激素；肌内脂肪；腹脂；雞；mRNA表達

Prevalence and genotype of Chlamydia psittaci in faecal samples of birds from zoos and pet markets in Kunming, Yunnan, China

Yue Feng, Yue-mei Feng, Zhong-hua Zhang, Shao-xiong Wu, Du-bo Zhong, Chen-jian Liu

DOI: 10.1631/jzus.B1500091 Downloaded: 2355 Clicked: 3528 Cited: 0 Commented: 0(p.311-316) <Full Text> <PPT> 1597

Chinese summary <21> 雲南(nán)省昆明市動物(wù)園和寵物(wù)市場中(zhōng)鳥類鹦鹉熱衣原體(tǐ)的流行病學調查及其基因型分(fēn)布研究

目的：調查雲南(nán)省昆明市動物(wù)園和寵物(wù)市場的鹦形目鳥類中(zhōng)鹦鹉熱衣原體(tǐ)的流行情況。
創新點：首次在雲南(nán)地區開(kāi)展鹦形目鳥類中(zhōng)鹦鹉熱衣原體(tǐ)的流行病學調查，發現該地區鹦形目鳥類中(zhōng)具有較高的鹦鹉熱衣原體(tǐ)感染率。
方法：本研究共采集8種鹦形目鳥類的新鮮糞便樣本136份，其中(zhōng)動物(wù)園樣本60份，寵物(wù)市場樣本76份。首先，利用高靈敏和高特異性的TaqMan MGB探針熒光定量聚合酶鏈反應（qPCR）方法檢測糞便樣品中(zhōng)鹦鹉熱衣原體(tǐ)的感染率，然後針對陽性樣品，利用PCR技術進行鹦鹉熱衣原體(tǐ)OmpA基因擴增、純化、測序以及基因型分(fēn)析。
結論：本實驗結果顯示：鹦鹉熱衣原體(tǐ)的感染率爲19.9% （27/136），其中(zhōng)寵物(wù)市場鳥類中(zhōng)鹦鹉熱衣原體(tǐ)的感染率（26.3%；20/76）明顯高于動物(wù)園（11.7%；7/60）（P=0.034）；金剛鹦鹉中(zhōng)感染率最高，達41.2%（7/17）。同緣關系進化樹(shù)分(fēn)析表明，這些鹦鹉熱衣原體(tǐ)都屬于易于由鳥向人跨物(wù)種傳播的A型。綜上所述，昆明地區鹦形目鳥類中(zhōng)具有較高的鹦鹉熱衣原體(tǐ)流行，給飼養人員(yuán)和觀鳥者的健康帶來了潛在的威脅。

關鍵詞組：鹦鹉熱衣原體(tǐ)；基因型；OmpA基因；流行病調查；雲南(nán)

Biomolecular characterization, identification, enzyme activities of molds and physiological changes in sweet potatoes (Ipomea batatas) stored under controlled atmospheric conditions

C. O. Oladoye, I. F. Connerton, R. M. O. Kayode, P. F. Omojasola, I. B. Kayode

DOI: 10.1631/jzus.B1400328 Downloaded: 2666 Clicked: 3129 Cited: 0 Commented: 0(p.317-332) <Full Text> <PPT> 1433

Chinese summary <19> 甘薯貯藏環境中(zhōng)黴菌的生(shēng)物(wù)分(fēn)子特征、鑒定和酶活性及甘薯生(shēng)理變化的研究

目的：鑒定甘薯貯藏環境中(zhōng)黴菌的生(shēng)物(wù)分(fēn)子特征和酶活性，并比較不同試劑處理後甘薯的生(shēng)理變化。
方法：從不同溫度下(xià)保存的甘薯得到黴菌菌株，提取其細菌基因組DNA，進行聚合酶鏈反應（PCR）及測序鑒定。将甘薯分(fēn)成撲海因處理組、次氯酸鈉處理組和對照組，在爲期三個月的貯藏時間内，對黴菌緻病性、酶活性和空氣條件對甘薯的生(shēng)理變化的影響進行評估。
結論：實驗結束後，撲海因處理組的變質率爲5%，次氯酸鈉組爲55%，對照組爲100%。研究發現，甘薯組織變質主要由于不同的微生(shēng)物(wù)酶的活動，尤其是受感染組織的果膠酶活性。因此，建議将撲海因作爲甘薯貯藏之前的保鮮劑。

關鍵詞組：氣調貯藏；酶活性；撲海因；黴菌特征；腐敗；次氯酸鈉