Journal of Zhejiang University

Current Issue: <JZUS-B>

Journal of Zhejiang University-SCIENCE B (Biomedicine & Biotechnology)

ISSNs 1673-1581 (Print); 1862-1783 (Online); CN 33-1356/Q; started in 2005,Monthly.

JZUS-B is an international "Biomedicine & Biotechnology" reviewed-Journal indexed by SCI-E, MEDLINE, PMC, BA, BIOSIS Previews, JST, ZR, CA, SA, AJ, ZM, CABI, CSA, etc., and supported by the National Natural Science Foundation of China. It mainly covers research in Biomedicine, Biochemistry and Biotechnology, etc.

Impact factor: 1.099 (2011), 1.108 (2012), 1.293 (2013), 1.278 (2014), 1.303 (2015), 1.676 (2016), 1.815 (2017), 1.879 (2018).

Journal of Zhejiang University SCIENCE B

ISSN 1673-1581(Print), 1862-1783(Online), Monthly

2015 Vol.16 No.6 P.413-572

<<< CONTENTS >>>

Sepcial Issue on Molecular Nutrition

Editorial

Molecular nutrition: basic understanding of the digestion, absorption, and metabolism of nutrients

Xiang-hua Yan

DOI: 10.1631/jzus.B1500130 Downloaded: 2082 Clicked: 3310 Cited: 1 Commented: 0(p.413-416) <Full Text>

Chinese summary <40> 分(fēn)子營養學：解析營養物(wù)質在體(tǐ)内的消化、吸收和代謝過程的分(fēn)子機理

概要：分(fēn)子營養學是營養科學近年來發展的一(yī)個重要研究方向，主要研究營養物(wù)質在動物(wù)機體(tǐ)内消化、吸收、代謝與利用等過程中(zhōng)的分(fēn)子機理。随着組學技術滲透到營養科學研究領域，分(fēn)子營養學得到迅猛的發展。營養物(wù)質在消化、吸收和代謝過程中(zhōng)的分(fēn)子機理解析有助于進一(yī)步揭開(kāi)動物(wù)營養學研究領域的"黑箱"理論，爲動物(wù)健康養殖提供科學依據。

關鍵詞組：分(fēn)子營養學；組學技術；吸收；代謝

Reviews

Review: Within-litter variation in birth weight: impact of nutritional status in the sow

Tao-lin Yuan, Yu-hua Zhu, Meng Shi, Tian-tian Li, Na Li, Guo-yao Wu, Fuller W. Bazer, Jian-jun Zang, Feng-lai Wang, Jun-jun Wang

DOI: 10.1631/jzus.B1500010 Downloaded: 5430 Clicked: 10958 Cited: 11 Commented: 0(p.417-435) <Full Text> <PPT> 2478

Chinese summary <878> 母豬營養狀态對仔豬初生(shēng)重窩内變異的影響

概要：本綜述旨在總結仔豬初生(shēng)重窩内變異對仔豬健康、生(shēng)長及生(shēng)産管理造成的不利影響、形成因素、以及改善窩内變異的措施。在現代化高産母豬養殖中(zhōng)，仔豬初生(shēng)重窩内變異程度及低初生(shēng)重豬的比例大(dà)幅增加，導緻新生(shēng)期存活率、生(shēng)長性能大(dà)大(dà)降低。初生(shēng)重窩内變異的影響因素包括母豬排卵率、卵子質量、排卵持續時間、胚胎附植能力、子宮容積、胎盤體(tǐ)積和效率等；品種差異對仔豬初生(shēng)重的均勻度也有很大(dà)影響。在妊娠的三個關鍵階段（斷奶-配種間隔期、妊娠早期和妊娠後期）進行針對性的營養調控有望一(yī)定程度上提高窩内初生(shēng)重均勻度。目前已被報道的包括：在配種前母豬日糧中(zhōng)添加葡萄糖或者維生(shēng)素Ａ，妊娠後期添加谷氨酰胺均可改善仔豬初生(shēng)重均勻度，精氨酸以及支鏈氨基酸也有提高仔豬初生(shēng)重一(yī)緻性的潛能。但總體(tǐ)而言，目前相關研究相對較少、潛在的分(fēn)子機制仍不明确，需要大(dà)量深入的研究來加深對妊娠期母體(tǐ)與胎兒發育過程相關生(shēng)物(wù)學事件、營養素作用機制的理解，爲制定出更加科學有效的母豬飼喂措施提供理論基礎。

關鍵詞組：窩内變異；豬；死亡率；發病率；生(shēng)長性能；母豬營養

Review: Cross-talk between bile acids and intestinal microbiota in host metabolism and health

Yang-fan Nie, Jun Hu, Xiang-hua Yan

DOI: 10.1631/jzus.B1400327 Downloaded: 4965 Clicked: 11033 Cited: 15 Commented: 0(p.436-446) <Full Text> <PPT> 2371

Chinese summary <267> 膽汁酸與腸道微生(shēng)物(wù)的對話(huà)機制及其在宿主代謝與健康中(zhōng)的作用

概要：膽汁酸隻在肝髒中(zhōng)合成，并通過直接作用或間接作用抑殺腸道微生(shēng)物(wù)。而腸道微生(shēng)物(wù)又(yòu)可以促進初級膽汁酸轉化爲次級膽汁酸，從而改變機體(tǐ)内膽汁酸的組成。初級膽汁酸和次級膽汁酸均可調控法尼酯X核受體(tǐ)（FXR）的表達，已有研究發現，FXR在膽汁酸的合成與代謝、葡萄糖代謝、脂質代謝和肝髒自噬中(zhōng)發揮着重要作用。此外(wài)，膽汁酸在腸道微生(shēng)物(wù)的互作中(zhōng)起到了重要作用。本文主要綜述了膽汁酸與腸道微生(shēng)物(wù)之間的互作及其在宿主代謝調控中(zhōng)的作用，首次探讨了膽汁酸與腸道微生(shēng)物(wù)的互作可能調節自噬相關信号通路。

關鍵詞組：膽汁酸；法尼酯X核受體(tǐ)；腸道微生(shēng)物(wù)；宿主代謝；自噬

Articles

Tissue lipid metabolism and hepatic metabolomic profiling in response to supplementation of fermented cottonseed meal in the diets of broiler chickens

Cun-xi Nie,Wen-ju Zhang,Yan-feng Liu,Wen-xia Ge,Jian-cheng Liu

DOI: 10.1631/jzus.B1400255 Downloaded: 2994 Clicked: 4814 Cited: 2 Commented: 0(p.447-455) <Full Text> <PPT> 1786

Chinese summary <34> 肉雞日糧中(zhōng)添加發酵棉粕對其組織脂類代謝及肝髒代謝譜的影響

目的：旨在研究發酵棉粕對肉雞脂類代謝的影響。
創新點：将熒光定量聚合酶鏈反應PCR和代謝組學方法相結合，就采食發酵飼料（發酵棉粕）肉雞的組織脂類代謝相關基因及肝髒代謝譜進行分(fēn)析，發現發酵棉粕具有調控肉雞脂類代謝的作用。該研究爲研究日糧中(zhōng)複雜(zá)營養素對動物(wù)機體(tǐ)代謝的調控提供了新思路。
方法：将180隻21日齡肉雞随機分(fēn)爲三組，每組6個重複，每個重複10隻雞。對照組飼喂未發酵棉粕底物(wù)，試驗組分(fēn)别飼喂熱帶假絲酵母發酵棉粕和熱帶假絲酵母與釀酒酵母複合發酵棉粕。飼喂21天後，采集肉雞腹部脂肪和肝髒進行組織基因表達和肝髒代謝組學分(fēn)析。
結論：發酵棉粕可通過下(xià)調肝髒FAS、ACC和腹脂LPL等基因的表達，改變肝髒多種内源性代謝的代謝途徑，進而降低肉雞腹部脂肪沉積和肝髒甘油三酯含量。

關鍵詞組：發酵棉粕；脂類代謝；肉雞；基因表達；代謝組學

Influence of dietary taurine and housing density on oviduct function in laying hens

Bin Dai, Yuan-shu Zhang, Zi-li Ma, Liu-hai Zheng, Shuang-jie Li, Xin-hong Dou, Jian-sen Gong, Jin-feng Miao

DOI: 10.1631/jzus.B1400256 Downloaded: 2579 Clicked: 4293 Cited: 2 Commented: 0(p.456-464) <Full Text> <PPT> 1955

Chinese summary <28> 日糧中(zhōng)添加牛磺酸對不同飼養方式蛋雞輸卵管功能的影響

目的：本研究旨在調查飼喂牛磺酸和降低飼養密度對蛋雞輸卵管功能的影響。
創新點：着眼于動物(wù)健康的動物(wù)福利，探讨在現代社會高密度飼養的籠養雞伴随的許多健康問題。
方法：在本研究中(zhōng)，綠殼蛋雞被随機分(fēn)爲散養組、低密度組和高密度組，每組又(yòu)被分(fēn)爲對照組和飼喂牛磺酸實驗組。每個組别的蛋雞日常飲食是一(yī)樣的，除了實驗組中(zhōng)添加0.1%的牛磺酸。15天後，無菌采集輸卵管組織，并分(fēn)析了組織病理學學上的變化、炎症介質水平、氧化和抗氧化水平等指标的變化。
結論：這些數據表明牛磺酸可以保護輸卵管組織，降低炎症介質水平、氧化水平以及增強抗氧化水平等。另外(wài)，散養和低密度飼養同樣能降低氧化應激和輸卵管炎症因子水平等。

關鍵詞組：飼養模式；牛磺酸；蛋雞；炎症；輸卵管損傷

iTRAQ-based quantitative proteomic analysis of longissimus muscle from growing pigs with dietary supplementation of non-starch polysaccharide enzymes

Ji-ze Zhang, Yang Gao, Qing-ping Lu, Ren-na Sa, Hong-fu Zhang

DOI: 10.1631/jzus.B1400266 Downloaded: 2579 Clicked: 4146 Cited: 5 Commented: 0(p.465-478) <Full Text> <PPT> 1756

Chinese summary <33> 基于iTRAQ定量蛋白(bái)質組學技術分(fēn)析日糧中(zhōng)添加非澱粉多糖酶對生(shēng)長豬背最長肌中(zhōng)蛋白(bái)表達影響

目的：通過日糧中(zhōng)添加非澱粉多糖酶，運用同位素标記相對和絕對定量技術（iTRAQ技術）分(fēn)析非澱粉多糖酶對生(shēng)長豬背最長肌蛋白(bái)質表達有何影響，爲飼料中(zhōng)添加非澱粉多糖酶提供理論基礎。
創新點：采用iTRAQ定量蛋白(bái)質組學技術，通過對生(shēng)長豬背最長肌蛋白(bái)質表達進行高通量分(fēn)析，發現日糧中(zhōng)添加非澱粉多糖酶可影響許多功能蛋白(bái)表達，從分(fēn)子水平闡述了其發揮作用的機理。
方法：将體(tǐ)重約39kg生(shēng)長豬（48頭）随機分(fēn)爲兩個處理，每個處理4個重複，每個重複6頭豬。對照組飼喂基礎日糧，試驗組在基礎日糧中(zhōng)添加0.6%非澱粉多糖酶。50天試驗期後，每個重複屠宰1頭豬（n=8），取背最長肌，通過iTRAQ定量蛋白(bái)質組學技術分(fēn)析肌肉組織中(zhōng)差異蛋白(bái)表達。
結論：iTRAQ定量蛋白(bái)質組學分(fēn)析結果顯示，試驗組與對照組相比，共發現51個差異蛋白(bái)，其中(zhōng)38個可進行生(shēng)物(wù)學功能定位（圖1，表6）。差異表達蛋白(bái)中(zhōng)與能量生(shēng)成、蛋白(bái)質合成、肌肉分(fēn)化、免疫、抗氧化和解毒相關蛋白(bái)表達量上調，而與炎症反應相關蛋白(bái)表達量下(xià)調。綜上所述，生(shēng)長豬日糧中(zhōng)添加非澱粉多糖酶不僅可改善生(shēng)産性能，同時還可調節肌肉中(zhōng)諸多代謝功能。

關鍵詞組：非澱粉多糖酶；背最長肌；蛋白(bái)質組學；生(shēng)長豬

Effects of alfalfa saponin extract on mRNA expression of Ldlr, LXRα, and FXR in BRL cells

Xin-ping Liang, Dong-qiang Zhang, Yan-yan Chen, Rui Guo, Jie Wang, Cheng-zhang Wang, Ying-hua Shi

DOI: 10.1631/jzus.B1400343 Downloaded: 2359 Clicked: 4187 Cited: 2 Commented: 0(p.479-486) <Full Text> <PPT> 1784

Chinese summary <25> 苜蓿皂苷提取物(wù)對BRL細胞Ldlr、LXRα和FXRmRNA表達的影響

目的：分(fēn)析苜蓿皂苷提取物(wù)對正常和脂變Buffalo大(dà)鼠肝細胞（BRL細胞）中(zhōng)Ldlr、LXRα和FXRmRNA表達的影響，進而初步探讨苜蓿皂苷調節脂質代謝及降低機體(tǐ)膽固醇含量的機制。
創新點：苜蓿皂苷具有調節脂質代謝，降低機體(tǐ)膽固醇含量的作用，但是目前對其機理研究并不多，特别是在細胞水平上。本試驗以BRL細胞爲對象，研究苜蓿皂苷對膽固醇代謝相關基因表達的影響，從而探究苜蓿皂苷在細胞水平上對膽固醇代謝的調節作用。
方法：通過50%胎牛血清誘導BRL細胞48h建立細胞脂肪變性模型，運用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRT-PCR）檢測正常和脂變BRL細胞Ldlr、LXRα和FXRmRNA的表達，從而得出各處理組BRL細胞内Ldlr、LXRα和FXRmRNA表達的變化。
結論：（1）添加苜蓿皂苷後，正常BRL細胞中(zhōng)LdlrmRNA的表達量顯著上調，脂變BRL細胞LdlrmRNA的表達有增加的趨勢；（2）苜蓿皂苷可以顯著下(xià)調正常和脂變BRL細胞中(zhōng)LXRα和FXRmRNA的表達。因此，在細胞水平上，苜蓿皂苷可能通過促進Ldlr的表達，抑制LXRα和FXR的表達，從而調節BRL細胞膽固醇的代謝。

關鍵詞組：苜蓿皂苷提取物(wù)；脂變BRL細胞；膽固醇代謝；mRNA表達

Effect of dietary supplementation of Bacillus subtilis B10 on biochemical and molecular parameters in the serum and liver of high-fat diet-induced obese mice

Kai Lei, Ya-li Li, Yang Wang, Jing Wen, Hong-zhao Wu, Dong-you Yu, Wei-fen Li

DOI: 10.1631/jzus.B1400342 Downloaded: 2576 Clicked: 5133 Cited: 7 Commented: 0(p.487-495) <Full Text> <PPT> 2043

Chinese summary <27> 日糧中(zhōng)添加枯草芽孢杆菌B10對高脂日糧誘導的小(xiǎo)鼠脂肪代謝及抗氧化的影響

目的：探究枯草芽孢杆菌B10對高脂日糧誘導的小(xiǎo)鼠脂肪代謝及氧化應激的改善作用，并初步探讨其作用機制。
創新點：證明了枯草芽孢杆菌B10可以有效改善高脂日糧誘導的小(xiǎo)鼠脂肪代謝和氧化應激，且發現此作用主要與B10調節脂肪代謝基因（PPARα、DHCR24、HMGCS2）及氧化應激基因（XO、p53）表達和谷胱甘肽過氧化物(wù)酶（GSH-Px）活力有關。
方法：将ICR雄鼠分(fēn)爲對照組（飼喂高脂日糧）和實驗組（飼喂添加枯草芽孢杆菌菌粉的高脂日糧）。飼喂30天後，收集小(xiǎo)鼠的血清及肝髒樣品。采用試劑盒測定抗氧化及脂肪代謝相關指标和肝髒中(zhōng)8-羟基脫氧鳥苷（8-OHdG）含量。使用熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）測定小(xiǎo)鼠肝髒中(zhōng)脂肪代謝和氧化應激相關基因的表達水平。
結論：飼喂含有枯草芽孢杆菌B10的高脂日糧能夠有效降低小(xiǎo)鼠的體(tǐ)重（表2），降低血清中(zhōng)葡萄糖和甘油三酯含量及谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活力（表3和4）；下(xià)調肝髒中(zhōng)脂肪合成相關基因表達量，但上調脂肪分(fēn)解相關基因表達量（圖1），并提高肝髒中(zhōng)抗氧化相關基因表達量（圖2）。綜上所述，枯草芽孢杆菌B10能有效調節小(xiǎo)鼠脂肪代謝，并改善其氧化應激。

關鍵詞組：枯草芽孢杆菌；高脂日糧；氧化應激；脂肪代謝

Effects of reducing dietary protein on the expression of nutrition sensing genes (amino acid transporters) in weaned piglets

Li Wu, Liu-qin He, Zhi-jie Cui, Gang Liu, Kang Yao, Fei Wu, Jun Li, Tie-jun Li

DOI: 10.1631/jzus.B1400259 Downloaded: 2393 Clicked: 4468 Cited: 9 Commented: 0(p.496-502) <Full Text> <PPT> 1780

Chinese summary <24> 降低日糧粗蛋白(bái)水平對斷奶仔豬營養感受體(tǐ)基因（氨基酸轉運載體(tǐ)）表達的影響

目的：驗證日糧中(zhōng)粗蛋白(bái)質濃度對斷奶仔豬氨基酸轉運載體(tǐ)的影響效應。
創新點：從營養物(wù)質感應體(tǐ)的角度分(fēn)析采用低氮日糧的可行性，并探索營養限制對營養轉運體(tǐ)的影響及它們間的相互作用。
方法：十八頭初始體(tǐ)重9.57公斤的斷奶仔豬被随機分(fēn)爲三組（每組6個重複），分(fēn)别飼喂含有14%、17%和20%的粗蛋白(bái)日糧45天。按照理想蛋白(bái)質模型，日糧分(fēn)别添加賴氨酸、蛋氨酸+半胱氨酸、蘇氨酸和色氨酸來滿足斷奶仔豬的需要，整個試驗期自由采食。試驗結束後，屠宰仔豬并采集小(xiǎo)腸樣品。與14%粗蛋白(bái)組相比，空腸中(zhōng)ASCT2、4F2hc和ATB⁰mRNA表達在17%和20%粗蛋白(bái)水平組分(fēn)别上升23.00%、12.00%、6.00%和48.00%、47.00%、56.00%。
結論：結果表明，14%粗蛋白(bái)水平組外(wài)源添加合成氨基酸并不能促進氨基酸轉運載體(tǐ)增加氨基酸的吸收來滿足斷奶仔豬的生(shēng)長性能。然而，17%粗蛋白(bái)水平組可以減少氮排放(fàng)到環境中(zhōng)，同時又(yòu)能滿足此階段斷奶仔豬的生(shēng)長發育。因此，17%粗蛋白(bái)水平組對這個階段斷奶仔豬最合适。

關鍵詞組：粗蛋白(bái)；氨基酸平衡；氨基酸轉運載體(tǐ)

Duodenum has the greatest potential to absorb soluble non-ammonia nitrogen in the nonmesenteric gastrointestinal tissues of dairy cows

Ying-ming Xie, Qing-biao Xu, Yue-ming Wu, Xin-bei Huang, Jian-xin Liu

DOI: 10.1631/jzus.B1400299 Downloaded: 2384 Clicked: 3852 Cited: 3 Commented: 0(p.503-510) <Full Text> <PPT> 1816

Chinese summary <24> 十二指腸在奶牛非腸系膜系統中(zhōng)吸收可溶性非氨态氮的潛在作用

目的：研究奶牛非腸系膜系統對可溶性非氨态氮的吸收能力。
創新點：目前國内外(wài)關于研究奶牛非腸系膜系統（瘤胃、瓣胃和十二指腸）内容物(wù)内可溶性非氨态氮和組織内轉運載體(tǐ)表達的關系非常少。本文研究了瘤胃、瓣胃和十二指腸内可溶性非氨态氮的濃度，并檢測了這些組織内小(xiǎo)肽和氨基酸轉運載體(tǐ)（PepT1、ASCT2、y⁺LAT1和ATB^0,+）的表達量，并進行了系統性的比較，在底物(wù)和基因之間建立了一(yī)定的聯系。
方法：通過酸解法和氨基酸分(fēn)析儀檢測得到了瘤胃、瓣胃和十二指腸内可溶性非氨态氮的濃度（表3和4），并利用熒光定量聚合酶鏈反應（qRT-PCR）檢測了各組織部位的載體(tǐ)基因表達量（圖1）。
結論：十二指腸内容物(wù)的可溶性非氨态氮濃度最高，并且其載體(tǐ)的表達量也最大(dà)，表明十二指腸在奶牛非腸系膜系統中(zhōng)吸收可溶性非氨态氮的潛力最大(dà)，其中(zhōng)小(xiǎo)肽在可溶性非氨态氮中(zhōng)占了大(dà)量比例。

關鍵詞組：可溶性非氨态氮；非腸系膜系統；轉運載體(tǐ)；奶牛

Growth of embryo and gene expression of nutrient transporters in the small intestine of the domestic pigeon (Columba livia)

Ming-xia Chen, Xiang-guang Li, Jun-xian Yang, Chun-qi Gao, Bin Wang, Xiu-qi Wang, Hui-chao Yan

DOI: 10.1631/jzus.B1400340 Downloaded: 2651 Clicked: 4738 Cited: 10 Commented: 0(p.511-523) <Full Text> <PPT> 1786

Chinese summary <22> 家鴿胚胎的生(shēng)長與其小(xiǎo)腸營養素轉運載體(tǐ)基因表達

目的：探索家鴿胚胎期器官生(shēng)長發育及其小(xiǎo)腸營養素轉運載體(tǐ)基因表達規律，爲家鴿胚胎期的營養調控提供理論基礎。
創新點：第一(yī)次較全面地研究了家鴿胚胎期小(xiǎo)腸氨基酸轉運載體(tǐ)基因表達規律。
方法：利用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（real-timeRT-PCR）技術，同時結合了多内标校正方法對小(xiǎo)腸營養素轉運載體(tǐ)基因表達模式進行分(fēn)析。
結論：在家鴿胚胎期發育的過程中(zhōng)，不同的器官生(shēng)長模式不完全一(yī)緻。營養素轉運載體(tǐ)^b0,+AT、EAAT3、LAT4、PepT1、NHE2、NHE3和y⁺LAT2基因的表達與小(xiǎo)腸重量呈正相關關系，CAT1、CAT2和EAAT2基因的表達與小(xiǎo)腸重量呈負相關關系。

關鍵詞組：胚胎生(shēng)長；營養素轉運載體(tǐ)；基因表達；小(xiǎo)腸；家鴿

Molecular cloning, characterization and expression of the energy homeostasis-associated gene in piglet

Sheng-ping Wang, Yun-ling Gao, Gang Liu, Dun Deng, Rong-jun Chen, Yu-zhe Zhang, Li-li Li, Qing-qi Wen, Yong-qing Hou, Ze-meng Feng, Zhao-hui Guo

DOI: 10.1631/jzus.B1400260 Downloaded: 2672 Clicked: 4617 Cited: 4 Commented: 0(p.524-532) <Full Text> <PPT> 1882

Chinese summary <26> 豬Enho基因的分(fēn)子克隆及其仔豬的組織分(fēn)布

目的：通過pEnho基因的克隆，分(fēn)析pEnho基因在仔豬相關組織的分(fēn)布情況，增加仔豬糖脂代謝方面相關的知(zhī)識，爲通過調控adropin來促進仔豬的健康和生(shēng)長提供理論基礎。
創新點：首次克隆了豬Enho基因，命名爲pEnho，其基因序列提交至美國國立生(shēng)物(wù)技術信息中(zhōng)心（NCBI）（No.GQ414763）。
方法：通過實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈式反應（real-timeRT-PCR）方法獲得豬Enho基因序列，并應用BLAST、ClustalW、PHYLIP、TMHMM、Helixturnhelix等生(shēng)物(wù)信息學軟件對其基因序列進行分(fēn)析；通過熒光定量PCR方法檢測了不同日齡（出生(shēng)後1、7、14和21天）豬Enho基因的組織分(fēn)布（肝髒、肌肉、空腸前端、空腸後端和回腸）。
結論：克隆得到pEnho基因序列；發現随着仔豬日齡的增加，其表達量有下(xià)降；在組織分(fēn)布上，産後7天内pEnho在腸道（特别是回腸）的表達量較高，在第14天和第21天，各被檢組織的表達量無顯著差異。

關鍵詞組：Adropin；Enho；基因克隆；仔豬；定量PCR

Comparative studies of two methods for miRNA isolation from milk whey

Xiao-lu Jin, Zi-hai Wei, Lan Liu, Hong-yun Liu, Jian-xin Liu

DOI: 10.1631/jzus.B1400355 Downloaded: 2486 Clicked: 3940 Cited: 0 Commented: 0(p.533-540) <Full Text> <PPT> 1903

Chinese summary <28> 兩種乳清miRNA分(fēn)離(lí)提取方法的比較研究

目的：系統比較兩種從液态乳清中(zhōng)分(fēn)離(lí)提取miRNA的方法。
創新點：首次比較發現提取柱吸附法分(fēn)離(lí)乳清miRNA的效果優于醇沉澱法。
方法：采用柱吸附法和醇沉澱法分(fēn)别對乳清中(zhōng)的miRNA進行提取，采用NanoDropND-1000分(fēn)光光度計和基于Bioanalyzer2100的微芯片凝膠電泳檢測RNA提取質量。通過熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）檢測外(wài)源加入的miRNA及乳清内源的miRNA豐度。确定最優方法後擴大(dà)樣本容量，采用20份牛奶樣本進行提取，并通過熒光定量PCR檢測了外(wài)源miRNA提取的穩定性及牛奶内源miRNA提取的重複性。
結論：乳清miRNA提取柱吸附法優于醇沉澱法，且重複性好。

關鍵詞組：乳清miRNA；提取方法；柱吸附法

Effects of heat stress on serum insulin, adipokines, AMP-activated protein kinase, and heat shock signal molecules in dairy cows

Li Min, Jian-bo Cheng, Bao-lu Shi, Hong-jian Yang, Nan Zheng, Jia-qi Wang

DOI: 10.1631/jzus.B1400341 Downloaded: 2889 Clicked: 5580 Cited: 8 Commented: 0(p.541-548) <Full Text> <PPT> 2101

Chinese summary <30> 熱應激對奶牛血液中(zhōng)胰島素、脂肪因子、AMP激活蛋白(bái)激酶和熱休克信号分(fēn)子的影響

目的：比較熱應激和非熱應激狀态下(xià)，奶牛血液中(zhōng)胰島素、脂肪因子（瘦素和脂聯素）、AMP激活蛋白(bái)激酶（AMPK）和熱休克信号分(fēn)子的變化，探索奶牛對熱應激的代謝響應。同時，通過比較不同程度熱應激，尋找穩定生(shēng)物(wù)标記物(wù)評估奶牛熱應激。
創新點：研究了熱應激對奶牛血液中(zhōng)脂肪因子和AMPK的影響，驗證了熱應激條件下(xià)，脂聯素和AMPK的關聯性。科學假設了熱休克信号分(fēn)子作爲生(shēng)物(wù)标記物(wù)的可能性，通過比較不同程度熱應激，得到了對熱應激敏感性高的信号分(fēn)子。
方法：通過牛屬專一(yī)性的酶聯免疫吸附試劑盒，快速檢測奶牛血液中(zhōng)目标物(wù)的含量。
結論：熱應激對奶牛胰島素和瘦素的分(fēn)泌無直接影響。然而，熱應激導緻幹物(wù)質采食量降低，在相同的幹物(wù)質采食量基礎上，熱應激提高了胰島素和瘦素濃度。熱應激導緻脂聯素和AMPK升高；脂聯素和AMPK的協同作用是奶牛機體(tǐ)調節，适應熱應激的重要途徑。同時，建議将血液中(zhōng)的熱休克轉錄因子（HSF）和熱休克蛋白(bái)70（HSP70）作爲生(shēng)物(wù)标記物(wù)評估熱應激，通過監測它們含量的變化預防熱應激。

關鍵詞組：熱應激；奶牛；血液；溫濕度指數；生(shēng)物(wù)标記物(wù)

Heat stress inhibits proliferation, promotes growth, and induces apoptosis in cultured Lantang swine skeletal muscle satellite cells

Chun-qi Gao, Yin-ling Zhao, Hai-chang Li, Wei-guo Sui, Hui-chao Yan, Xiu-qi Wang

DOI: 10.1631/jzus.B1400339 Downloaded: 2535 Clicked: 5261 Cited: 9 Commented: 0(p.549-559) <Full Text> <PPT> 1966

Chinese summary <27> 熱應激對豬骨骼肌衛星細胞增殖和生(shēng)長的影響

目的：探究熱應激對藍(lán)塘豬骨骼肌衛星細胞增殖與生(shēng)長的影響，分(fēn)析其作用機制。
創新點：通過體(tǐ)外(wài)細胞模型研究了熱應激對豬骨骼肌衛星細胞增殖與生(shēng)長的影響，發現熱應激通過Akt/mTOR/S6K途徑調控細胞的生(shēng)長。
方法：本試驗選用1日齡藍(lán)塘豬背最長肌的骨骼肌衛星細胞，對照組爲37°C正常培養，熱應激組培養溫度爲41°C，其它培養條件相同。采用細胞計數、MTT法、流式細胞術等手段分(fēn)析比較熱應激對藍(lán)塘豬骨骼肌衛星細胞增殖與生(shēng)長的影響；利用實時逆轉錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）和蛋白(bái)質印迹法（Westernblot）等方法，檢測了熱休克蛋白(bái)HSP70、半胱氨酸蛋白(bái)酶-3（caspase-3）及哺乳動物(wù)雷帕黴素靶蛋白(bái)（mTOR）信号通路關鍵基因的表達。
結論：（1）41°C熱處理可引起藍(lán)塘豬骨骼肌衛星細胞産生(shēng)熱應激反應;（2）熱應激72h會通過改變細胞周期、抑制細胞增殖并誘導細胞凋亡等共同作用減少細胞數目;（3）熱應激通過Akt/mTOR/S6K途徑調控細胞的生(shēng)長。

關鍵詞組：熱應激；藍(lán)塘豬；細胞增殖；細胞生(shēng)長；凋亡；Akt/mTOR/S6K信号通路

Leucine and histidine independently regulate milk protein synthesis in bovine mammary epithelial cells via mTOR signaling pathway

Hai-na Gao, Han Hu, Nan Zheng, Jia-qi Wang

DOI: 10.1631/jzus.B1400337 Downloaded: 2423 Clicked: 4513 Cited: 7 Commented: 0(p.560-572) <Full Text> <PPT> 1801

Chinese summary <31> 亮氨酸和組氨酸通過mTOR信号通路調控奶牛腺上皮細胞中(zhōng)酪蛋白(bái)的合成

目的：以體(tǐ)外(wài)培養的永生(shēng)化奶牛乳腺上皮細胞（CMEC-H）爲模型，利用蛋白(bái)免疫印迹法（Westernblotting）檢測酪蛋白(bái)和哺乳動物(wù)雷帕黴素靶蛋白(bái)（mTOR）信号路徑元件的蛋白(bái)磷酸化表達。進一(yī)步探索亮氨酸和組氨酸通過mTOR信号途徑調控酪蛋白(bái)合成機制的重要意義。
創新點：首次在CMEC-H模型中(zhōng)研究不同濃度的亮氨酸和組氨酸通過mTOR複合物(wù)1（mTORC1）中(zhōng)mTOR（Ser²⁴⁸¹）、mTOR調控蛋白(bái)（Raptor，Ser⁷⁹²）和G蛋白(bái)β亞基樣蛋白(bái)（GβL）對酪蛋白(bái)表達調控的影響。研究證明mTOR（Ser²⁴⁴⁸）并不是在乳腺上皮細胞中(zhōng)激活mTOR信号通路的唯一(yī)磷酸化位點，mTOR（Ser²⁴⁸¹）同樣可作爲激活mTOR信号通路的生(shēng)物(wù)标記。
方法：以厄爾平衡溶液代替培養基，設爲陰性對照，分(fēn)别添加不同濃度的亮氨酸或組氨酸，利用Westernblotting檢測酪蛋白(bái)和mTOR信号路徑元件的蛋白(bái)表達。
結論：與陰性對照組相比，當在CMEC-H細胞中(zhōng)添加0.45~10.80mmol/L亮氨酸6h時，4種酪蛋白(bái)的表達和mTOR（Ser²⁴⁸¹）、Raptor（Ser⁷⁹²）、真核翻譯起始因子4E（eIF4E，Ser²⁰⁹）和真核細胞翻譯延伸因子（eEF2，Thr⁵⁶）的磷酸化表達均顯著上調（P<0.01）。而當亮氨酸濃度在10.80mmol/L時，真核翻譯起始因子4E結合蛋白(bái)1（4EBP1，Thr³⁷）的磷酸化表達被抑制；在5.40~10.80mmol/L時，核糖體(tǐ)蛋白(bái)S6（RPS6，Ser^235/236）的磷酸化被抑制。當添加0.15~9.60mmol/L組氨酸6h時，αs2-酪蛋白(bái)、β-酪蛋白(bái)、κ-酪蛋白(bái)的表達和mTOR（Ser²⁴⁸¹）、Raptor（Ser⁷⁹²）、核糖體(tǐ)S6蛋白(bái)激酶（S6K1，Thr³⁸⁹）、4EBP1（Thr³⁷）、eIF4E（Ser²⁰⁹）和eEF2（Thr⁵⁶）的磷酸化表達均顯著上調（P<0.01）。而當組氨酸濃度在9.60mmol/L時，αs1-酪蛋白(bái)的表達量降低；在0.15和9.60mmol/L時，GβL被抑制；在4.80~9.60mmol/L時，RPS6磷酸化被抑制。線性回歸模型顯示，當添加亮氨酸時，αs1-酪蛋白(bái)的表達與mTOR、S6K1和eEF2的磷酸化表達成顯著的正相關（P<0.01；表4）；當添加組氨酸，β-酪蛋白(bái)和κ-酪蛋白(bái)均與eEF2磷酸化表達成顯著的正相關（P<0.01；表5）。綜上所述，在乳腺上皮細胞中(zhōng)，亮氨酸和組氨酸能通過mTOR信号通路促進酪蛋白(bái)基因的表達。

關鍵詞組：奶牛乳腺上皮細胞；亮氨酸；組氨酸；蛋白(bái)免疫印迹；mTOR；酪蛋白(bái)